摘要：從煙曲霉Aspergillus fumigatus GIM3.20中克隆獲得了一種脂肪酶B基因(AFLB)。通過(guò)序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)AFLB與南極假絲酵母脂肪酶B(CALB)的氨基酸序列有31%的一致性,兩者同屬CALB家族脂肪酶;AFLB含有與家族其他成員類(lèi)似的保守五肽序列(SWSQG),預(yù)測(cè)AFLB的催化三聯(lián)體分別為S233、D318和H361,其中Ser233位于保守五肽序列中;此外AFLB含有一段N-端延長(zhǎng)序列(由第1~128位氨基酸組成),是曲霉屬脂肪B的特有序列。在畢赤酵母中成功地異源表達(dá)了脂肪酶AFLB,并通過(guò)親和層析進(jìn)行了純化。SDS電泳結(jié)果顯示,該酶存在部分高度N-糖基化和部分無(wú)糖基化的兩種形態(tài),對(duì)應(yīng)分子量分別為45~66 kDa和42 kDa。酶學(xué)性質(zhì)表征結(jié)果顯示,重組脂肪酶AFLB最適反應(yīng)pH值為7.0,最適反應(yīng)溫度為40℃,并在50℃以下具有較好穩(wěn)定性,其最適底物為肉豆蔻酸對(duì)硝基苯酯。脂肪酶AFLB與CALB有高度親緣性,具有潛在的工業(yè)應(yīng)用前景。